【Utilisation prévue】

Le kit est une PCR fluorescente en temps réel avec sonde TaqMan pour détecter qualitativement l'ORF1ab, l'acide nucléique des gènes N du 2019-nCoV dans un prélèvement de gorge, les expectorations chez les patients présentant des symptômes suspects de pneumonie et des cas de regroupement.

Les résultats des tests sont à titre de référence clinique uniquement et ne peuvent pas être considérés comme une seule référence pour le diagnostic clinique. Il est recommandé de faire une analyse manifeste en ce qui concerne les symptômes cliniques et d'autres résultats de laboratoire.

Les opérateurs doivent avoir une expérience de formation professionnelle en amplification génique ou en test de méthode de biologie moléculaire, et avoir les qualifications requises pour les opérations de laboratoire. Le laboratoire doit avoir des précautions de sécurité biologique et des procédures de protection raisonnables.

【Principe d'essai】

Dans ce kit, les amorces et les sondes sont conçues pour les régions conservées et spécifiques de l'ORF1ab, N de 2019-nCoV, respectivement. La PCR fluorescente est utilisée pour détecter l'ARN viral après purification de l'acide nucléique de l'ARN de l'échantillon.

Ce kit de test utilise la technologie PCR fluorescente en temps réel. Pendant l'amplification PCR, la sonde se lie à la matrice et le groupe rapporteur 5' de la sonde est clivé par l'enzyme Taq (activité exonucléase 5' → 3'), ainsi s'éloigner du groupe d'extinction pour générer un signal fluorescent. La courbe d'amplification en temps réel est automatiquement tracée en fonction du signal de fluorescence détecté et la valeur Ct de l'échantillon est calculée (le nombre de cycles subis lorsque le signal de fluorescence dans chaque tube de réaction atteint le seuil fixé). Les fluorophores FAM, VIC et Texas red sont utilisés pour marquer le gène ORF1ab, les sondes du gène N dans la solution de réaction. En utilisant un seul test, la détection qualitative des deux gènes ci-dessus du 2019-nCoV peut être effectuée simultanément.

Pour éviter les faux résultats négatifs, le kit est fourni avec un contrôle interne (IC), qui est marqué avec le groupe fluorescent Cy5 qui pourrait être utilisé pour surveiller la procédure d'extraction et la solution de réaction.

【Composants principaux】

Noter¹: Les différents lots de composants ne sont pas échangeables.

Noter²: Le kit de test ne contient pas de réactif d'extraction d'acide nucléique, veuillez préparer le réactif avant utilisation.

1. Manipulation des échantillons

Ajoutez 10 μL de contrôle interne dans 200 μL de contrôle positif et de contrôle négatif, respectivement pour effectuer l'extraction de l'acide nucléique.

2. Préparation des réactifs :

Préparation du système : prenez le lyophilisateur d'amplification d'acide nucléique préinstallé, suivi en ouvrant le sachet en aluminium et centrifugez-le immédiatement. La quantité d'échantillon de chaque test doit être un multiple de 8 contenant un contrôle positif et un contrôle négatif. Ajoutez 35 μL d'eau sans nucléase dans chaque tube de réaction.

3. Chargement de l'échantillon :

Ajoutez 5 μL d'acide nucléique d'échantillon à tester, un contrôle positif, un contrôle négatif indiquant que le volume de réaction total est de 40 μL dans la solution de réaction allouée. car cela ne nécessite pas un mélange fin, et fermez simplement le couvercle du tube de réaction PCR, centrifugez le Liquide dans la paroi du tube au fond du tube, traitez ainsi l'amplification PCR.

Après vérification, on estime que l'ajout de 5 μL à 10 μL d'huile de paraffine dans le système de PCR n'affectera pas le résultat de la PCR, mais évitera la contamination et la vaporisation de liquide.